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低温生物***——保存方法介紹

脱水存法

①沙土保存法，能产孢子的***及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。

② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。

③ 石蜡油封存法，在斜面***培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。

生物***发酵成有机肥如何操作的？

发酵肥料操作过程：

1、***一般用量为0.2%--0.5%。

2、原辅料及要求：主要物料：水果渣、干蔗渣、食用菌渣、酒糟、啤酒糟、糖渣、醋渣、淀粉渣、木薯渣、柠檬酸渣、酱油渣、味精渣、粉渣、豆腐渣、药渣、油渣、油饼粕、糠麸、棉菜粕、霉变饲料、污泥、糖厂啤酒厂渣泥、屠宰下脚料、潲（泔）水、剩饭菜、人动物粪便等大宗物料。

辅料：各种农作物秸秆、树叶杂草、瓜藤、稻草、松壳、花生壳、锯木屑、谷壳粉、统糠等干燥、粉碎、高碳即可。

3、原辅料配比：主料∶辅料=5:1-3:1。

4、水分控制在60-65%，手抓物料成团刚好出水。

5、按要求将***、主料和辅料全部混合均匀

6、环境温度15℃以上，一次堆料不少于4方，堆成宽1.5～2米、高0.6米左右、长度不限的堆，并用棍在堆内打通气孔。

7、堆温升至50℃时开始翻倒，每天一次，如堆温超过65℃，再加次翻倒。温度控制在70℃以下，温度太高对养分有影响。

8、腐熟标志：堆温降低，物料疏松，无物料原臭味，稍有氨味，堆内产生白色菌丝。

9、腐熟的原肥：直接使用，生产商品有机肥、生物有机肥、有机无机复混肥、生物有机无机复混肥等。

注意：

①视水分多少增减配比，发酵混合物的总水分应控制在60～65%。过高过低均不利于发酵，水过少，发酵慢；水过多会导致通气差、升温慢并产生臭味。水分合适与否判断办法：手紧抓一把物料，指缝见水印但不滴水，落地即散。

②如果按每吨添加1公斤尿素或10公斤过磷酸钙发酵效果。

低温生物***——常用***介绍

巨大芽孢菌

巨大芽孢菌(Bacillus megaterium de Bary，1884)：杆状，末端圆，单个或呈短链排列。1.2-1.5×2.0-4.0微米，严格好氧，能运动，革兰氏阳性，芽孢1.0-1.2×1.5-2.0微米，椭圆形，中生或次端生 。芽孢从椭圆形到长形不等；不能生成乙酰；菌株能运动，但运动缓慢，需要游离氧；发酵葡萄糖产酸；DNA的G+C含量为36%-38%。 

接触酶阳性；水解淀粉和酪素；V-P反应和卵黄反应阴性。琼脂平板微波状，平隆，浅黄白色转浅灰白色至浅灰褐色，表面略有光泽，在马铃薯块上生长，由浅黄***变为***。液化明胶慢、胨化牛奶、水解淀粉。 

工业上用于生产葡萄糖异构酶，巨大芽孢菌在回收***方面有着重要作用，还能降解土壤中难溶的含磷化合物，使之成为作物能吸收的可溶物巨大芽孢菌与球形芽孢菌混合培养时具有固氮增效作用，非常适合制成微生物肥料。 

巨大芽孢菌作为一种重要解磷***被广泛应用于农业生产中，将其优化培养制成菌剂肥料使用，可以提高土壤肥质，增产增收。近年来，随着微生物肥料在农业上的广泛应用，巨大芽孢菌以其在土壤中的解磷作用而被深入研究，是工业上生产解磷固钾肥的常用***，同时在水体处理和提高***发酵增香效果上有特别的作用。 

巨大芽孢菌能降解有机磷药和曲霉。张广志等人从长期受有机磷药污染的土壤中分离出3株能降解胺磷和芽孢菌，其中2株为巨大芽孢菌。孙丰芹发现巨大芽孢菌TRS-3对曲霉AFB1有去除作用，其发酵上清液降解AFB1的能力达到78.55%。